AATCC 100－2012 抗菌纺织品的评价方法

本标准1961年由AATCC委员会RA31研发完成：1965,1981,1988（标题改变），1993,1999,2012修正；1969,1971,1974,1985,2009,2010编辑修正；1977,1981,1989,1998重申；1986,2004编辑修正并重申。

1. 目的和范围

1.1本测验方法对抗菌活性的评估提供一个定量程序。对抗菌纺织材料的评价将根据其抗菌活性来确定。若抗菌整理试样的抗菌活性（繁殖被抑制），通过定性程序，将抗菌整理试样于空白样的活性进行对比，就能清楚地说明抗菌的活性能否被接受。但是，如果杀菌的活性被期望或者暗示，则定量的评估是必要的。定量评估也为抗菌整理的纺织材料的使用提供了更清楚地描述的一种手段。

2.原理

2.1本测试方法通过织物与细菌接触24小时后，对抗菌活性的定量评定，经培养后，细菌从织物上洗脱，通过细菌减少的百分比来计算。

3.专有术语

3.1抗菌活性：衡量抗菌剂功效的指标。

3.2抗菌剂：在纺织品上，任何可以杀死细菌（杀菌剂）、或者干扰其繁殖发育，具有抑菌活性（抑菌剂）的化学品。

4.安全防范

注：这些安全预防措施只是起到提供信息的目的。在这种测试方法中安全正确地使用处理材料的技术是用户的责任。制造商必须对具有的细节进行参照，例如材料安全数据表和其他制造商建议。全部OSHA标准和规章也必须被参照。

4.1本测试应该由经过合适培训的人员来执行。实验室的微生物和生物医学的生物研究安全性应参照美国卫生于公众服务部的规定进行（见13.1）。

4.2警告：在试验过程中使用的一些细菌可能引起过敏或致病。因此，一定要采取一些必要和合理的预防措施，以此来消除在实验室和在相关环境人员的危险，可以穿保护衣和呼吸保护来防止细菌的渗透。

4.3良好的实验室操作，在全部实验室地区戴安全眼镜。

4.4全部化学制品应该被小心处理。

4.5洗眼水及其他安全设备应放置在附近以便处理紧急事件的发生。

4.6在处理之前需对所有被污染的样品盒测试材料进行全部消毒。

4.7在这个程序过程中，使用的化学制品的暴露必须等于或低于政府部门规定的水平（例如，职业安全与健康管理委员会的被控制可允许的暴露限制 见29CER1910.1000 www.osha.gov）。另外，美国政府工业卫生联合会议的安全限量包括时间加权平均数，短期暴露限制和对空气污染物暴露最高限度可作为一般指导，应参照执行（见13.2）。

5. 适用局限性

5.1对于定性测试，可采用相对快而容易的方法来确定纺织材料的抗菌活性，可参照AATCC147方法。纺织材料的抗菌活性评价：平行划线法。

6.测试菌种

6.1试验细菌

6.1.1金黄色葡萄球菌，ATCC 6538 革兰氏阳性菌，CIP4.83，DSM799，NBRC13276，NCIMB9518或等同菌种。（见12.3和12.4）。

6.1.2 肺炎克雷伯菌，ATCC 4352，革兰氏阴性菌，CIP104216，DSM789，NBRC13277，NCIMB10341或等同菌种。（见13.10）。

6.13根据样品最终使用的目的，其他合适菌种也可被使用。

7. 设备，培养基和试剂

7.1培养基和试剂，合适的肉汤/琼脂培养基有：

7.1.1营养肉汤/琼脂培养基（NB，NA）

7.1.2胰蛋白胨大豆肉汤/琼脂（TSB，TSA）

7.1.3脑心浸出液肉汤/琼脂（BHIB，BHIA）

7.1.4 Muller-Hinton肉汤/琼脂

7.1.5 对于疏水性的纤维织物，接种液可用：

    氯化钠       8.5g

    琼脂         3.0g

    无菌蒸馏水   1000ml

7.2设备

7.2.1培养箱，37±2℃（99±4℉）

7.2.2接种环

7.2.3酒精灯

7.2.4水浴锅，45-50℃（113-122℉）

7.2.5灭菌移液管：1ml

7.2.6带盖试管：10ml

7.2.7无菌培养皿：100mm×15mm

7.2.8无菌镊子

7.2.9立体显微镜（40x倍镜）

7.2.10直尺

8.测试样品

8.1准备。以下以纺织样品来描述。纺织材料的织物形式不同可以进行适当的修改。

8.1.1试验样品的大小与形状：试验的纺织品切成直径为4.8cm±0.1cm（1.9±0.03英寸）的圆形（尽可能地使用钢模切取），将样品堆叠在250ml带有螺旋盖的广口瓶里，用于旋加1.0ml的接种液。样品数量由纤维的类型和纺织品的结构来决定。例如，4片印染棉布的样品将吸收1ml。每瓶所使用的样品的片数应该被报告。

8.1.2空白对照样。按上述相同的方法，准备没有抗菌处理的相同纤维类型和织品结构的样品，作为空白对照样

8.1.3样品的消毒。应根据不同的试样选择合适的消毒方法。使用的方法取决于纤维的类型和处理方法。棉花，醋酸盐和一些人造纤维都可以在高压灭菌器内消毒。羊毛可以在环氧乙烷或者在流动的蒸汽中间（部分）消毒，后者可能会对某些处理物造成小的损害。

9.试验步骤

9.1接种菌液的浓度要求。从经接种并培养24h的营养肉汤培养物中吸取1.0ml±0.1ml，采用合适的稀释液进行稀释，对（1）未处理的空白对照样品或者（2）“0”接触时间的标准测试样品接种，活菌浓度为1×10⁵cfu/ml~2×10⁵cfu/ml.试验菌的稀释液应采用营养肉汤（见7.1.1,7.1.5和12.5）

9.1.1织物的接种。当使用金黄色葡萄球菌时，震荡24h的培养物并静置15~20分钟，采用合适的稀释液，稀释至活菌浓度为1×10⁵cfu/ml~2×10⁵cfu/ml.的接种浓度，用于试样的接种。先在消过毒的培养皿里分别放上样品，使用吸管吸取接种液1.0ml±0.1ml，接种在试样上，应保证接种液的均匀分布（见12.6）。然后，将试样无菌转移到带盖的广口瓶内，旋紧盖子，防止蒸发。

9.1.2在接种之后（即“0”接触时间），立即分别添加100ml±1ml中和液，到装有接种的空白对照样和接种的抗菌测试样，以及未接种的抗菌测试样的每个广口瓶内。

9.1.3中和液应包含能中和抗菌纺织品的抗菌活性的成分，中和过程应注意纺织品的pH值要求（如整理剂、抗菌剂等）。使用何种组成的中和液完成中和过程应被报告（见12.7）

9.1.4用力振荡每个“0”接触时间广口瓶1min。采用10倍稀释法，用水做一系列的稀释，浇灌营养琼脂平皿，10⁰，10¹，10²的稀释通常是合适的。

9.1.5定时保温培养。对空白对照样及抗菌处理样，接种后，在37℃±2℃温度培养18-24h．也可在接种后分别对各试样保温培养1~6h，为抗菌活性提供有用的信息。

9.1.6对定时保温培养的样品的广口瓶，分别添加100ml±1ml中和液。用力振荡1min。采用10倍稀释法，用水做一系列的稀释，浇灌营养平皿，10⁰，10¹，10²的稀释通常是合适的。对于空白对照样，可做进一步的稀释。

9.1.7将已浇灌营养琼脂并凝固的平皿放入培养箱，在37℃±2℃（或者其他最佳的温度）保温培养48h。

10.评价

10.1报告细菌计数作为每个样品的细菌数量（在容器中的样布），而不是每升中和液的细菌数量。报告在10⁰的“0”计数要小于100.

10.2通过以下公式计算细菌减少的百分比：

1）R=100（B-A）/B

R=细菌减少的百分比

A=接种且定时培养之后抗菌处理样的细菌数

B=“0”接触时间抗菌处理样的细菌数

2）R=100（C-A）/C

C=“0”接种时间空白对照样的细菌数

如果B和C不相同，取数值大的。如果B和C没有明显不同，（B/C）/2应按下面公式：

3）R=100（D-A/D）

D=（B+C）/2

10.3如果未处理的空白布没有被提供，用以下公式：

Bg=100[(B-E)-(A-F)/B-E]

         A,B=（见10.2）

E=未接种的测试样品的细菌数

F=未接种，但经预湿处理，且培养后，测试样品的细菌数

Bg=背景有机体

10.4试验的有效性判断：（1）“0”接触时间未接种抗菌测试布样的菌落数为零；（2）接种且定时保温培养后的空白对照样的菌落数显著增加；仅适用于用肉汤作稀释液的情况。（见9.1和12.5要求）。

10.5对每个测试菌种，报告细菌减少的百分比数。

10.6通过试验的标准必须被确定与相关方。

10.7报告接种稀释液的使用情况。

11.精度和偏差

11.1（见12.8）研究显示实验室内平板计数测试（SPC）精度：

（a）分析员之间18%（b）分析员8%。

12.附注与参考

12.1出版物可从美国健康与人类服务机构-CDC/NH –HHHS出版物获得。电话84-8395；网址：www.hhs.gov。

12.2小册子可从出版局索取：ACGIH，Kemper Woods Center，1330 Kemper Meadow Dr.，Cincinnati OH 45240；电话：513/742-2020；网址：www.acgih.org。

12.3 ATCC即美国典型微生物菌种保藏：P.O. Box1549，ManassasVa 20108；电话：703/365-2700；传真：703/365-2701；CIP即法国巴斯德研究所菌种保藏中心；DSM即德国微生物菌种保藏中心；NBRC即日本技术评价研究所生物资源中心；NCIMB即英国食品工业与海洋细菌菌种保藏中心；WFCC即世界培养物保藏协会。

12.4测试用的培养基保持纯净，无污染的，菌种无变异，使用无菌的转接和接种以避免其受到污染，菌种严格坚持每月转种以避免变异，定期检查菌种纯度，通过选择性平板上的特征菌落。

12.5试验菌的稀释要在0.85%生理盐水或合适的缓冲溶液中准备。当疏水性的织物要被测试时，如需要一个稳固的培养基，可以在织物的接种时所用的接种稀释液中获得。

12.6表面活性剂可以添加到稀释液中，用来增加疏水性织物的湿润度，但不能引起菌落数量的减少，应报告表面活性剂的使用和浓度。

12.7如果使用蒸馏水来替代中和液，总会有这种可能，一些抗微生物制剂被保留下来。

12.8皮勒.J.L.莱斯利，J.W.梅瑟，通过分析菌落数的复制技术错误，及食品保护。第45卷，1982，第238-240页。